PCR, BLab in grado di adoperare metodiche complesse al passo coi tempi (e le nuove necessità alimentari)
Per adeguarsi alle nuove esigenze/emergenze legate alla sicurezza alimentare, Bonassisa Lab comunica di essere dotata delle tecnologie idonee a eseguire di default le analisi per la ricerca di Salmonella SPP e Listeria monocytogenes rispettivamente con i metodi PCR AFNOR BRD 07/06-07/04 e AFNOR BRD 07/10-04/05.
Entrambi i metodi sono accreditati e le metodiche PCR rappresentano un’efficace alternativa ai metodi tradizionali ISO (lunghi e laboriosi). La PCR real time consente, attraverso la rilevazione di sequenze specifiche per il microrganismo in esame, la ricerca dei patogeni in campioni alimentari e ambientali. La PCR è una tecnica di grande efficacia impiegata per generare molteplici copie di DNA target attraverso diversi cicli di riscaldamento e raffreddamento. Il riscaldamento consente la denaturazione del DNA con il successivo raffreddamento si verifica l’appaiamento con le sonde di DNA, complementari alle regioni di DNA target specifiche per il tipo di microrganismo, e la loro copia. Le sonde di DNA sono legate ad un fluoroforo che emetterà fluorescenza solo se collegato alla sequenza target del microrganismo ricercato. La fluorescenza viene misurata alla fine di ogni ciclo di amplificazione fino all’ultimo ciclo ed il software collegato fornisce il risultato di positività o negatività. Ad ogni ciclo di PCR per poter validare il risultato viene inserito un controllo positivo e un controllo negativo fornito nei kit adoperati. All’interno della
miscela di amplificazione è contenuto un DNA sintetico con un fluoroforo differente dal primo. L’amplificazione del DNA sintetico escluderà che la miscela di reazione contenga sostanze che inibiscono la reazione di polimerizzazione a catena evidenziando eventuali campioni inibiti. I risultati di positività vanno confermati con substrati cromogeni specifici per il microrganismo ricercato. Il laboratorio ha acquisito un preparatore automatico, un ROBOT in grado di preparare i campioni da analizzare con la PCR evitando così l’errore umano e la possibile contaminazione crociata. Il metodo fornisce risultati negativi in 22-26h per la ricerca di Salmonella e 26-28h per la Listeria monocytogenes dall’inizio dell’analisi, mentre per la conferma dei positivi sono necessarie almeno ulteriori 24h. Questa tecnica riduce di molto i tempi di attesa oltre a essere una validissima alternativa alle metodiche tradizionali. Possono essere utilizzati come metodi alternativi alle ISO nell’ambito dell’autocontrollo essendo stati validati da un organismo indipendente secondo la ISO 16140-2:2016.